ISSN 1995-5537

Ж-л «Біотехнологія» Т. 1, № 1, 2008
С. 100-105, Бібліогр. 5, укр.
УДК 616.36:578.891

ОДЕРЖАННЯ РЕКОМБІНАНТНОГО АНАЛОГА БІЛКА р24 ВІРУСУ BLV

А. М. Коновалова, Ю. О. Кобозєв, Н. І. Грабченко, Л. О. Ганова

АТЗТ Наукововиробнича компанія «ДіапрофМед», Київ

Розроблено високоефективну технологію одержання рекомбінантного аналога білка р24 вірусу бичачої лейкемії з підтвердженими методом імуноферментного аналізу (ІФА) антигенними властивостями. У процесі досліджень відібрано найкращий штамм-реципієнт E. coli BL21(DE3) CodonPlus-RIL для інтродукції рекомбінантної плазміди, оптимізовано склад живильного середовища для культивування продуцента. Розроблено методику проведення металохелатафінного хроматографічного очищення та рефолдингу рекомбінантного білка. Як критерій для оцінки ефективності кожного етапу застосовували ІФА, за допомогою якого контролювали антигенні характеристики рекомбінантного білка. Встановлено, що вид штамму-продуцента та склад живильного середовища впливають на продуктивність і розподіл рекомбінантного білка у клітині між цитоплазматичною та нерозчинною фракціями. Розроблена технологія дає змогу одержувати препарати білка зі ступенем чистоти 98% та поліпшеними антигенними властивостями, що дозволяє використовувати його для підвищення специфічності та чутливості імуноферментних діагностичних тест-систем для виявлення збудника бичачої лейкемії.

Ключові слова: вірус бичачої лейкемії, білок р24, Escheriсhia coli BL21(DE3), металохелатафінна хроматографія, рефолдинг, імуноферментний аналіз.

© Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, 2008