УТВОРЕННЯ АНГІОСТАТИНІВ У ХОДІ ПРОЦЕСІНГУ ПЛАЗМІНОГЕНУ, ОПОСЕРЕДКОВАНОГО ТРОМБОЦИТАМИ: ІМУНОХІМІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ Л.Г. Капустяненко, О.І. Юсова, В.В. Корса, Т.В. Гриненко

Деталі: Перегляди: 135

ISSN 2410-7751 (Print)
ISSN 2410-776X (Online)

cover biotech acta general

Biotechnologia Acta Т. 17, № 5, 2024
С. 14-23, Бібліограф. 73, англ.
УДК: 615.37:616.89-008.444
doi: https://doi.org/10.15407/biotech17.05.014

Повний текст: (PDF, англ.)

УТВОРЕННЯ АНГІОСТАТИНІВ У ХОДІ ПРОЦЕСІНГУ ПЛАЗМІНОГЕНУ,
ОПОСЕРЕДКОВАНОГО ТРОМБОЦИТАМИ: ІМУНОХІМІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ

Л.Г. Капустяненко, О.І. Юсова, В.В. Корса, Т.В. Гриненко

Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України, Київ, Україна

Вивчення реципрокних взаємодій між плазміноген/плазміновою системою та тромбоцитарною ланкою гемостазу є необхідним як для розуміння біохімічних механізмів регуляції процесів тромбоутворення й тромболізису, так і для з’ясування ролі тромбоцитів в ангіогенезі.

Метою цього дослідження було дослідити особливості процесінгу плазміногену мембраноасоційованими та цитозольними протеазами тромбоцитів.

Методи. Хроматографічний метод застосовано для ізоляції тромбоцитів із плазми крові. Плазміноген очищали з фракції за Коном III2,3 плазми крові людини афінною хроматографією на лізин-сефарозі. Аналіз життєздатності відмитих тромбоцитів та їхні відповіді на дію агоніста проведено оптичною агрегометрією. Процесінг плазміногену на тромбоцитах викликано стимуляцією тромбіном (1 NIH/мл) клітин, попередньо інкубованих з 0,25 мкМ Pg протягом 30 хв; 60 хв та 120 хв. Плазміноген та його кринглвмісні фрагменти на мембранах й у лізатах тромбоцитів детектували методом імуноблоту з використанням отриманих нами раніше поліклональних антитіл до кринглів плазміногену (K1-3 і K5).

Результати. Установлено, що екзогенний плазміноген сорбується на плазматичній мембрані тромбоцитів, перетворюється у Lys-форму та фрагментується до ангіостатинів та мінілазміногену, що свідчить про залучення різних протеїназ тромбоцитами для гідролізу плазміногену. Утворені ангіостатини клітинами не інтерналізуються. Підтверджено здатність тромбоцитів інтерналізувати екзогенний плазміноген у Glu-формі. Встановлено здатність інтерналізованого Glu-плазміногену в плині часу (120хв інкубації з 0,25 мкМ плазміногеном) змінювати конформацію на Lys-подібну, яку виявляють застосовані нами антитіла до К 5.

Висновки. Отримані результати надають нову інформацію про механізми регулювання тромбоцитами функціонування плазміноген/плазмінової системи на прикладі їхньої здатності генерувати фрагменти плазміногену — ангіостатини, можливості інтерналізації та секреції утворених ангіостатинів нативними та активованими тромбоцитами.

Ключові слова: плазміноген, кринглвмісні фрагменти, ангіостатини, тромбоцити, обмежений протеоліз, імуноблот, антитіла.