ISSN 2410-776X (Електронна версія)
ISSN 2410-7751 (Друкована версія)
Ж-л "Biotechnologia Acta" Т. 12, № 3, 2019
С. 75-81, бібл. 24, англ
УДК: 579.6:632.4:633.1
https://doi.org/10.15407/biotech12.03.075
О. Грицев1, 2, Ю. Шевченко2, Н. Воробйова1, Л. Скивка1
1Київський національний університет імені Тараса Шевченка, ННЦ «Інститут біології та медицини», Україна
2ТОВ «Сингента», Київ, Україна
Метою роботи було розробити швидкий і чутливий метод одночасної ідентифікації R. cerealis та R. solani упродовж однієї реакції. Чисті культури фітопатогенних грибів культивували 5 днів на картопляно-глюкозному агарі за 28 ?C, після чого відбирали міцелій та виділяли ДНК за допомогою комерційних тест-наборів. Молекулярну ідентифікацію проводили за допомогою ПЛР з подальшим електрофоретичним розділенням продуктів ампліфікації в агарозному гелі. Специфічні пари праймерів для ділянки з відомою послідовністю: RtubR4/RtubF4 для R. cerealis та ITS1/GMRS-3 для R. solani тестували щодо їхної специфічності та можливості застосування у мультиплексному варіанті ПЛР. Для перевірки специфічності праймерів здійснювали аналіз ПЛР з іншими фітопатогенними грибами та з ДНК, виділеною зі здорових рослин пшениці. Встановлено, що обрані нами пари праймерів продукували єдині специфічні фрагменти R. Cerealis і R. solani та не виявляли перехресної специфічності щодо інших фітопатогенних грибів. За допомогою градієнта температур встановлено оптимальні значення температур відпалу праймерів. Таким чином, розроблений нами протокол мультиплексної ПЛР придатний для одночасної ідентифікації Rhizoctonia cerealis та Rhizoctonia solani протягом однієї реакції і може бути використаний для діагностики поліетіологічних ризоктоніозів.
Ключові слова: фітопатогенні гриби, ризоктонії, мультиплексна ПЛР.
© Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, 2019