ISSN 1995-5537

Ж-л "Біотехнологія" Т. 4, № 6, 2011
С. 31-35, Бібліогр. 14, укр.
УДК: 577.151:544.023.223

ОКИСНЕННЯ ФЕНОЛУ КОВАЛЕНТНО ІММОБІЛІЗОВАНОЮ ПЕРОКСИДАЗОЮ ХРОНУ

І. І. Романовська, О. В. Осійчук, С. С. Декіна, Ю. А. Шестеренко,
О. В. Севастьянов, Т. Ю. Громовий

Фізико-хімічний інститут ім. О. В. Богатського НАН України, Одеса;
Інститут хімії поверхні ім. О. О. Чуйка НАН України, Київ;
Одеський національний медичний університет

За модифікованим методом Баха виділено частково очищений препарат пероксидази хрону (RZ = 1,0; активність 100 Од/мг протеїну). Молекулярну масу виділеної пероксидази хрону (42 972 Да) підтверджено методом мас-спектрометрії — матрично активованої лазерної десорбції/іонізації. Одержаний препарат був ковалентно іммобілізований шляхом періодатного окиснення полісахаридної мембрани «Діацел» з наступним відновленням боргідридом натрію у масовому відношенні ензим:носій 0,2:1. Отримано біокаталізатор з кількісним зв’язуванням протеїну, зі збереженням 88% активності (масове відношення ензим:носій 0,2:1), розширеними значеннями рН- і термооптимумів активності, збільшеною термостабільністю, стійкістю під час зберігання (8 міс). Кінетичні дослідження показали збільшення значень K_м за пероксидом водню і пірогалолом, зменшення значень V_max реакції, яка каталізується іммобілізованою пероксидазою хрону. Розроблений біокаталізатор у реакторі періодичної дії сприяв кількісному окисненню фенолу (1 мМ) упродовж 7 циклів використання та високому рівню його біоконверсії (95–50%) у наступні 15 циклів. Методом лазерної десорбціїї/іонізації вперше визначено молекулярну масу (близько 2 021 Да) нерозчинного у воді і більшості органічних розчинників полімерного продукту пероксидазного окиснення фенолу — поліоксифенілену (розмір частинок 15–75 мкм), що складається з 21 залишку.

Ключові слова: пероксидаза хрону, мембрана «Діацел», ковалентна іммобілізація, окиснення фенолу, поліоксифенілен.

© Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, 2008